Participação dos neutrófilos durante a implantação embrionária no desenvolvimento da placenta em camundongos / Participation of neutrophils during embryonic implantation in the placental development in mice

A implantação do embrião na parede uterina é um processo complexo que consiste na interação do blastocisto com as células epiteliais do útero, e depende de diferentes tipos celulares do microambiente uterino. Embora a literatura mostre a participação de neutrófilos neste processo, os dados ainda são incipientes para proposição da função exata destas células nos períodos iniciais da gestação. Dados do nosso grupo de pesquisa mostraram que neutrófilos pró-angiogênicos induzem a tolerância gestacional, e que a depleção de neutrófilos durante as fases iniciais da gestação prejudica a implantação do blastocisto e a progressão da gestação. Com base nestes resultados, o presente estudo visou investigar se a depleção de neutrófilos na fase pré-receptiva da janela de implantação do blastocisto altera a morfologia placentária. Para tanto, foi utilizado o modelo de gestação alogênica, onde camundongos fêmeas C57BL/6, após cruzamento com machos Balb/C foram tratadas com anticorpo anti-Ly6G ou isotipo no dia 1,5 da gestação (24 horas após a detecção do plug vaginal) em dose suficiente para manter a depleção de neutrófilos circulantes por 48 horas (200µg/ 500µL; i.p). No final da gestação (dia 18,5), o sangue periférico foi coletado e, em seguida, os animais foram submetidos a laparotomia para retirada da placenta, a qual foi submetida à análise histológica. As análises dos leucócitos circulantes evidenciaram a efetividade do tratamento para depleção de neutrófilos periféricos. A análise histológica mostrou alterações significativas na morfologia da placenta nos animais tratados com anti-Ly6G. Foram detectadas a redução da zona juncional, de células trofoblásticas e de fatores angiogênicos, como fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF), e das moléculas de adesão intracelular-1 (ICAM-1) e de plaqueta e endotélio (PECAM-1). Esses dados evidenciam a importância dos neutrófilos nos primeiros dias de gestação para o desenvolvimento da placenta

Blastocyst implantation is a complex process, consisting of the interaction between blastocyst and uterine epithelial cells. Also, it is well known that the implantation site resembles an inflammatory response, with a profusion of recruited immune cells into the endometrial stroma and lumen from the blood. The role of macrophages, natural killers, and dendritic cells have been extensively studied, however, the participation of neutrophils in this process remains unclear. Data from our research group showed that pro-angiogenic neutrophils induced gestation tolerance, also peripheral neutrophils depletion at the time of active placental development led to smaller embryo sizes and abnormal placentation in mice. In this context, the present study aimed to investigate whether pharmacological depletion of neutrophils in mice in the blastocyst implantation phase alters placental morphology. Therefore, C7/BL/6 female mice, after mating with Balb/C males, were treated with an anti-Ly6G antibody or isotype on day 1 of gestation (after detection of the vaginal plug) at a dose sufficient to maintain the depletion of circulating neutrophils for 48 hours (200 µg/500µL; i.p). At the end of the gestational day (day 18), peripheral blood was collected, and then the animals were submitted to laparotomy for the placenta removal and subsequent histological analysis. The analysis of circulating leukocytes from neutrophils depleted mice showed a reduction of peripheral neutrophils up to 48 hours after antibody injection. The histological analysis showed significant alterations in the placenta morphology of the animals treated with anti-Ly6G. The morphometric analyses showed a reduction in the size of neutrophils depleted placenta due to diminished junctional zone and reduction of trophoblast cells. Also, it was observed a reduction of vascular endothelial growth factors (VEGF), reduction of adhesion molecules intracell-1 (ICAM-1), and platelets and endothelium (PECAM-1) positive cells in the junctional zone. In conclusion, these data show the importance of neutrophils on the first days of pregnancy for the development of the placenta

Caracterización de estadios del desarrollo embrio-fetal, vesícula coriónica y de placenta en la gata doméstica (Felis catus) mediante método ecográfico / Characterization of stages of embrio-fetal, chorionic vesicle and placenta development in the domestic cat (Felis catus) by ultrasonography

La ecografía es uno de los métodos de diagnóstico gestacional más utilizados, que permite confirmar una gestación temprana y realizar seguimientos del desarrollo embrio-fetal. En este estudio se emplearon 10 gatas gestantes, entre 10 meses a 6 años de edad, con fecha de cruza conocida. Se realizaron exámenes ecográficos seriados en los días 15 (estadio 1), 18 (estadio 2), 21 (estadio 3), 38 (estadio 4), y 45 (estadio 5) de gestación para medir parámetros biométricos. Vesícula coriónica: diámetro transversal (DTVC), diámetro longitudinal (DLVC); Placenta: grosor (GP); Feto: longitud céfalo-caudal (LCC), diámetro toraco-abdominal (DTA), diámetro cefálico (DC), tomándose un registro fotográfico de cada estadio. En el estadio 1, no se logró visualizar el embrión. En el estadio 2, el embrión se observó cercano a la pared midiendo en promedio 4,7 milímetros de LCC, el tubo endocárdico se observó funcional. En el estadio 3, se observó el cordón umbilical, pero resultó difícil distinguir los diferentes órganos, excepto el corazón, debido al movimiento causado por sus latidos. En el estadio 4, el feto adquiere movimientos, se observó órganos como el encéfalo, pulmones, el tabicamiento del corazón, diafragma, hígado, estómago, asas intestinales, vejiga y la osificación de huesos. Se observó la flexión de los miembros. En los miembros anteriores se visualizaron los dedos separados, con garras y cojinetes plantares. En el estadio 5, además de las características observadas en el estadio anterior, los riñones muestran la corteza y médula, las cámaras del corazón se visualizaron claramente. Se realizó una correlación lineal entre los parámetros biométricos estudiados y los resultados dieron valor significativo (p<0,0001) para la mayoría de éstos. Se logró caracterizar los estadios gestacionales estudiados. Siete de las diez gatas presentaron una gestación normal, mientras que una de ellas presentó en uno de sus fetos una malformación congénita y en las otras dos gatas se presentó muerte embrio-fetal.

Ultrasound is one of the most widely used methods for gestational diagnosis, allowing the detection of early pregnancy and evaluation of fetal growth and development. Ten pregnant cats (aged 10 months to-6 years) were used in this study, with known dates of mating. Serial ultrasound testings were performed on days 15th (stage 1), 18th (stage 2), 21st (stage 3), 38th (stage 4) and 45th (stage 5) of gestation, to measure biometric parameters (Chorionic vesicle: transverse diameter (DTVC), longitudinal diameter (DLVC); Placenta: thickness (GP); Fetus: cephalocaudal length (LCC), thoraco-abdominal diameter (DTA), cephalic diameter (DC). Photographic records were made at each stage. In stage 1, it was impossible to visualize the embryo. In stage 2, the embryo was observed near the wall measuring 4.7 mm on average LCC, and the endocardial tube was functioning. In stage 3, the umbilical cord was observed, but it was difficult to distinguish different organs, with the exception of the heart, which was detected by heartbeat movements. In stage 4, the fetus begins to move. Organs, such as the brain, lungs, heart septation, diaphragm, liver, stomach, bowel, bladder and bone ossification were observed. In the forelimbs, fingers apart with claws and footpads were visualized. In stage 5, in addition to the features observed in the previous stage, the kidneys show the cortex and medulla, and the heart chambers are clearly visualize. A linear correlation analysis among the biometric parameters was performed. Results were statistically significant for most parameters studied (p<0.0001). We characterized the gestational stages studied. Out of the ten cats studied, seven cats had a normal pregnancy. One cat showed one congenitally malformed fetus, and one fetal death occurred in the other two cats.

Alteraciones morfológicas de las vellosidades placentarias asociadas a malformaciones fetales múltiples del sistema esquelético / Morphological changes in placental villi associated with multiple malformations of the skeletal system

Describir y cuantificar alteraciones morfológicas en vellosidades placentarias de embarazadas cuyo feto desarrolló malformaciones esqueléticas múltiples. MÉTODOS: se analizaron cuatro placentas de abortos terapéuticos a las 13, 16, 20 y 38 semanas de gestación. Estas se compararon con placentas normales a la misma edad de gestación de abortos electivos por indicación médico legal. Tinción de hematoxilinaeosina se aplicó a 10 láminas de 5 regiones de cada placenta utilizando un protocolo con 4 variables cuantitativas: madurez, cambios fibrinoides, edema y fibrosis estromal y una variable cualitativa: trombosis. Los resultados cuantitativos se analizaron utilizando el análisis de varianza (ANAVAR) según arreglo completamente aleatorizado y el test de Tukey. Para la variable cualitativa se aplicó la prueba de tendencia para datos correlacionados. Se empleó el software statistix 8.0 y SAS 9.0 para Windows. RESULTADOS: existen diferencias significativas (p<0,05) entre las placentas asociadas a malformaciones múltiples del sistema esquelético y las placentas control en relación a las variables cuantitativas. No se encontraron diferencias significativas (p>0,05) en relación a la variable cualitativa. CONCLUSIONES: la población de vellosidades placentarias asociadas a malformaciones múltiples del sistema esquelético presentó un alto porcentaje de alteraciones indicando que la barrera placentaria está dañada afectando el intercambio de gases, nutrientes y metabolitos durante el desarrollo del feto...

To describe and quantify morphological changes in placental villi in pregnancies with multiple fetal malformations of the skeletal system. METHODS: four placentas from fetuses of gestational ages 13, 16, 20 and 38 weeks, aborted for therapeutic reasons were examined. Normal placentas of the same gestational age, from cases where legal elective abortion had been recommended on medical grounds, were taken as the control. The hematoxilineosin stain was applied to ten slides in five regions of each placenta using a protocol with four quantitative variables: maturity of villi, fibrinoid changes, edema and stromal fibrosis and one qualitative variable: thrombosis. The quantitative results were analyzed using ANOVA in a randomized manner and the Tukey test was applied; for the qualitative variable the trend test for correlated data was used. The software used was Statistix 8.0 and SAS 9.0 for Windows. RESULTS: there were significant differences (p<0.05) between the placentas associated with multiple malformations of the skeletal system and control placentas in terms of the quantitative variables. No significant differences were found (p>0.05) in relation to the qualitative variable. CONCLUSIONS: the population of placental villi associated with multiple malformations of the skeletal system exhibited a high percentage of changes which is an indication that the placenta is damaged, thereby affecting the exchange of gases, nutrients and metabolites during the development of the fetus...

Apoptose e expressão de Bcl-2 e das caspases 3 e 8 em placenta bovina, em diferentes estádios de gestação / Apoptosis and expression of Bcl-2 and caspases 3 and 8 in placenta of cows at different pregnancy stages

Apoptose e seus mecanismos reguladores são eventos fisiológicos cruciais para a manutenção da homeostase placentária, e o desequilíbrio desses processos pode comprometer a função placentária e, consequentemente, o sucesso da gravidez. Neste estudo, investigou-se a apoptose utilizando-se histomorfometria em lâminas coradas em HE e submetidas à reação de TUNEL. Além disso, avaliou-se a expressão de Bcl-2 e das caspases 8 e 3, pela reação de polimerase em cadeia em tempo real, em placentas saudáveis em diferentes estádios de gestação. Amostras de placentônios de vacas com quatro, seis e nove meses de gestação foram colhidas e processadas. O índice apoptótico aumentou progressivamente com o avanço da gestação. Tanto o Bcl-2 quanto as caspases 3 e 8 foram expressas nos três períodos estudados, sendo a expressão de Bcl-2 menor que a de caspase 8, que é menor que a de caspase 3. Estes resultados indicam que essas moléculas estão envolvidas na via apoptótica ativada na maturação placentária, exibindo um padrão de expressão ao longo da gestação e contribuindo para o equilíbrio fisiológico da celularidade e renovação celular na placenta bovina.

Apoptosis and its regulating mechanisms are crucial physiological events for the maintenance of the placental homostasis; and disequilibrium of these processes may compromise placental function and the success of the pregnancy. In this study, apoptosis was investigated by histomorphometry using slides stained with HE and TUNEL reaction. Besides that, Bcl-2 and caspases 8 and 3 expression were evaluated by real time polymerase chain reaction in healthy placentas under different gestacional ages. Samples of placentones of cows at 4th, 6th, and 9th months of gestation were harvested and processed. The apoptotic index gradually increased with the advance of the gestation. Bcl-2 and caspases 3 and 8 were expressed in all the studied periods, being the expression of Bcl-2 lower than that of caspase 8, which was lower than caspase 3. These results indicate that these molecules are involved in the activated apoptotic way in the placental maturation, showing a standard expression throughout the gestation and contributing for the physiological balance of the cellularity and cellular turn over in bovine placenta.

Caracterização da fusão caruncular em gestações naturais e de conceptos bovinos clonados / Characterization of the caruncular fusion in gestations of natural and cloned bovine conceptuses

O objetivo deste trabalho foi comparar as fusões carunculares em gestações de conceptos não clonados (CNC) e conceptos clonados (CC). Os CNC foram divididos segundo o período de gestação em Grupo I (2-3 meses, n=9), Grupo II (4-6 meses, n=9), Grupo III (7-8 meses, n=10) e Grupo IV (9 meses, n=7). Os CC formaram o Grupo V (9 meses, n=4). As carúnculas foram observadas macroscopicamente (número e dimensões: comprimento, largura e altura), microscopicamente e submetidas à análise estatística (5 por cento de significância). Observaram-se três tipos de fusões carunculares macroscópicas: ovais (morfologicamente normais); duas carúnculas adjacentes unidas e do tipo lobuladas, caracterizadas por regiões com várias carúnculas unidas apresentando falsa fusão ou deformação do parênquima caruncular. O comprimento das carúnculas foi de 1,55±0,57; 2,45±0,55; 4,66±2,00 e 5,72±1,90cm para os Grupos I, II, III e IV, respectivamente. Quanto à altura, as carúnculas apresentaram um crescimento linear durante a gestação e foram de 0,40±0,15; 0;57±0,21; 1,00±0,48 e 1,80±0,91cm, para os respectivos Grupos I, II, III e IV. A largura das carúnculas foi semelhante entre os Grupos I e II (0,97±0,30 e 1,42±0,71cm) e os Grupos III e IV (2,68±1,22 e 3,52±1,16cm). Quando o Grupo V foi comparado ao Grupo IV, as carúnculas do Grupo V apresentaram maior comprimento (5,72±1,90 vs. 7,88±2,13cm) e largura (3,52±1,16 vs. 4,93±1,46cm), porém foram semelhantes em altura (1,80±0,91 e 2,25±0,67cm). Verificou-se que em gestações de CC, as carúnculas apresentaram maior desenvolvimento que em gestações de CNC. As carúnculas fusionadas apresentaram medidas estatisticamente semelhantes às isoladas em todos os parâmetros e grupos. Sob microscopia de luz, observou-se a formação de um eixo estromal, da base da carúncula ao ápice da fissura fusional, de constituição histológica semelhante ao estroma endometrial. Também foram ineditamente definidos três formatos microscópicos: fusão propriamente ...

The objective of the study was to compare the characteristics of the caruncular fusion in gestations of non-cloned and cloned conceptuses. The non-cloned conceptuses were divided according to the gestation period: Group I (2 to 3 months; n=9), II (4 to 6; n=9); III (7 to 8; n=10) and IV (9 n=7). The cloned conceptuses formed the Group V: 9 months; n=4. The caruncles were observed macroscopically (number and dimensions: length, width and height), microscopically and submitted to statistical analysis (5 percent of significance). We observed three types of macroscopic caruncular fusions: oval (morphologically normal); two united adjacent caruncles and the lobulated type, characterized by regions with several united caruncles presenting a false fusion or deformation of the caruncular parenchyma. The length of the caruncles was 1.55±0.57; 2.45±0.55; 4.66±2.0 and 5.72±1.90cm for the groups I, II, III, IV respectively. As for the height, the caruncles presented a lineal growth during the gestation: 0.40±0.15; 0.57±0.21; 1.0±0.48 and 1.80±0.91cm, for the respective groups I, II, III and IV. The width of the caruncles was similar between the groups I and II (0.97±0.30 e 1.42±0.71cm) and the groups III and IV (2.68±1.22 and 3.52±1.16cm). When the group V was compared to the IV, the caruncles of the group V presented a larger length (5.72±1.90 vs. 7.88±.13cm) and width (3.52±1.16 vs. 4.93±1.46cm), however they were similar in height (1.80±0.91 and 2.25±0.67cm). We verified that in gestations of cloned conceptuses the caruncles presented a larger development than in gestations of non-cloned conceptuses. The fusioned caruncles presented measurements statistically similar to the isolated ones in all the parameters and groups. Under light microscopy, we observed the formation of a stromal axis from the basis of the caruncle to the apex of the fusional fissure, with the histological constitution similar to the endometrial stroma. Three microscopic shapes ...

Características morfológicas y morfométricas de la placenta de término, en recién nacidos pequeños para la edad gestacional (PEG) en la ciudad de Temuco-Chile / Morphometric and morphological characteristics of the placenta at term, in small for gestational age newborns (SGA) in the city of Temuco-Chile

El metabolismo placentario, el intercambio de sustancias y la producción de hormonas son funciones vitales de la placenta para mantener y promover el desarrollo normal del feto. Existen factores de riesgo que alteran este patrón en el caso del retardo del crecimiento intrauterino, cuyo resultado será un recién nacido (RN) pequeño para la edad gestacional (PEG) que presentará una mayor morbilidad, crecimiento físico e intelectual comprometido y una mayor probabilidad de desarrollar durante la vida adulta diferentes patologías. Los objetivos del presente trabajo son: 1. Reconocer las diferencias en los parámetros morfométricos, como el área de las vellosidades, el área de los vasos, el número de vasos y el área del sinciciotrofoblasto de las placentas de PEG en relación con placentas de recién nacidos AEG y 2. Relacionar el diagnóstico neonatal de PEG con las características morfométricas. Se utilizaron 25 placentas de término (37-42 semanas), 12 de recién nacidos adecuados a la edad gestacional (AEG), y 13 de recién nacidos pequeños para la edad gestacional (PEG). Las muestras fueron obtenidas de la maternidad del Hospital Hernán Henríquez Aravena de Temuco, IX Región Chile. De cada placenta se tomaron dos segmentos pericordonales, desde la placa subcorial hasta la placa basal y luego fueron fijadas en formalina tamponada al 10 por ciento. Las técnicas histológicas utilizadas fueron H-E azul de Alcián, Tricrómico de Masson, PAS-Hematoxilina y PAS-Diastasa. El área de las vellosidades mostraron diferencias significativas entre el grupo control (AEG) y el grupo PEG con p = 0,0194. En el grupo de PEG el área de los vasos fue significativamente mayor, con un valor de 234,05 i,m² en comparación con el grupo control cuyo promedio fue de 150.99 lm² (p = 0,0001). El número de vasos sanguíneos por vellosidad libre no mostró diferencias significativas. En relación con el área del sinciciotrofoblasto la diferencia no resultó ser significativamente ...

The placental metabolism, the exchange of substances and the production of hormones are vital functions of the placenta to maintain and promote the normal development of the fetus. There are risk factors that disrupt this pattern in the case of intrauterine growth retardation, whose outcome will be a small for gestational age (SGA) newborn having a higher morbidity, physical and intellectual growth pledged and greater probability of develop different pathologies during adulthood. The aims of this study are: 1 .-recognize the morphometric parameters differences as the area of the villi, the area of the vessel, the number of vessels and the area of placental syncytiotrophoblast SGA in connection with placentas of newborns AGA and 2.- relate the diagnosis of neonatal SGA with morphometric characteristics. We used 25 placenta at term (37-42 weeks), 12 newborns appropriate to the gestational age (AEG), and 13 small for gestational age infants (SGA). The samples were obtained from the Maternity Hospital Hernán Henriquez Aravena of Temuco, Chile IX Región. In each placenta two segments were taken from the subchorionic plate to the basal plate and then were fixed in 10 percent formalin buffered. The histological techniques used were H- E Alcián blue, Masson's Trichromic, Pas-hematoxylin Pas-diastase. The area of the villi showed significant differences between the control group (AEG) and the PEG group with p = 0.0194. In the group of PEG the area of vessels was significantly higher, with a value of 234.05 mm² compared with the control group whose average was 150.99 mm² (p = 0.0001). The number of blood vessels for free villi sampling not significant differences. Regarding the area of syncytiotrophoblast the difference was not significantly (p = 0.1410). In conclusion it was determined that PEG newborns placenta showed significant differences at the blood vessel area and free chorial villi area in relation to the AEG placenta.

Morphologic, morphometric and stereologic analysis of palatine mucosa of rat fetuses after methylmercury administration to the dams during pregnancy

El cloruro de metilmercurio, administrado oralmente a ratas wistar en el día 10 de la gestación (20 mg/kg), originó fetos y placentas menores y cordones umbilicales más cortos. Las incidencias de mortalidad y de reabsorciones se encontraron aumentadas. Histológicamente, el epitelio del paladar duro fue más fino, debido a la reducción significativa del espesor de capa espinosa, con células de menor tamaño y más numerosas. Por otro lado, el epitelio del paladar blando no mostró alteraciones del espesor, y las células presentaron las mismas características. Morfométriucamente, el vólumen celular estaba disminuido en los epitelios del paladar duro y blando. La densidad numérica celular fue mayor en los epitelios del paladar blando y duro. No se observaron alteraciones del espesor de la queratina en el epitelio de los dos regiones palatinas.